在损伤性肠炎模型的构建过程中,最常用的诱导剂葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS),葡聚糖硫酸钠是一种常用的化学诱导剂,可以引起急性和慢性结肠炎。DSS通过破坏肠道上皮屏障,引发炎症反应,模拟人类炎症性肠病(如溃疡性结肠炎)的病理特征。通过DSS诱导的斑马鱼肠炎模型可以用来研究肠道炎症反应及其潜在的治疗机制。
将斑马鱼饲养在标准条件下,水温28-29°C,光照周期14小时光照/10小时黑暗。定期更换水质,保持清洁。
将DSS溶解在系统水中,配制成所需浓度(通常为1-3%w/v),然后将斑马鱼转移到含有DSS的水中。可以采用间歇性DSS处理,例如每7天给予3天DSS处理,随后4天恢复期,重复多个周期。
试验前,禁食24h,以清除鱼肠道内排泄物,试验鱼用60mg/L间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐溶液浸泡麻醉5min,方便后期药物的注射操作。用5%质量分数的葡聚糖硫酸钠(分子量为500000)水溶液(磷酸盐缓冲液配制),分别通过口腔或肛门灌注的方式将葡聚糖硫酸钠水溶液注入鱼体中,每尾鱼灌注量为100μL,分为口腔灌注组和肛门灌注组;对照组为通过口腔灌注100μL的磷酸盐缓冲液。每组100尾斑马鱼。给药后,每日正常饲喂,同时认真观察并记录斑马鱼的状态。另外,斑马鱼肠道炎症可通过病理组织学进行分析,每个处理组保证至少3尾样本太阳成集团tyc45668cn。
肠壁增厚、肠黏膜结构破坏以及嗜酸性粒细胞浸润3个指标进行评价,未将不明确的杯状细胞数量纳入评价指标中。肠壁厚度(0=低厚度,0~<75μm;1=中度增厚,75~<95μm;2=重度增厚,95~<150μm);黏膜层褶皱结构外观(0=正常外观;1=轻微破坏;2=严重破坏);嗜酸性粒细胞浸润(0=几乎不存在;1=中等渗透;2=严重浸润)。3个指标得分之和为0~6,0~2为无炎症或轻度炎症;3~4为中度炎症;5~6为重度炎症。
口腔和肛门灌注的成体斑马鱼在前3d均出现一定程度的死亡,鱼游动缓慢,肛门灌注组的死鱼多数为体表充血,腹腔肿大或者肛门出血,而口腔灌注组的死鱼无明显现象。DSS处理后的斑马鱼可能出现体重下降、活动减少、体色变暗等症状。
马军,陈燕,刘璐,等.葡聚糖硫酸钠诱导的斑马鱼肠炎模型的初建[J].水产科学,2023,42(06):987-995.
往期实验方法,需要的老师可以按照以下操作进行查阅:进入公众号脑声常谈→底部菜单栏脑声助手方法检索→最上方搜索框输入实验名称,您找的实验方法就出来啦!